Floresan polarizasyonu (FP), biyokimya, farmakoloji ve çevre bilimi dahil olmak üzere çeşitli alanlarda kullanılan güçlü bir tekniktir. Önde gelen bir floresan dedektörü tedarikçisi olarak, doğru ve güvenilir FP ölçümlerinin önemini anlıyoruz. Bu blog yazısında, temel prensiplerden pratik hususlara kadar floresan polarizasyonunun nasıl ölçüleceğini araştıracağız.
Floresan polarizasyonunun temel ilkeleri
Floresan polarizasyonu, bir floresan molekül polarize ışık tarafından heyecanlandığında, yayılan ışığın da polarize edilmesine dayanır. Yayılan ışığın polarizasyon derecesi, floresan ömrü boyunca floresan molekülün dönme hareketine bağlıdır. Molekül büyükse veya bir makromoleküle bağlıysa, dönme hareketi kısıtlanır ve yayılan ışık oldukça polarize kalır. Tersine, molekül küçük ve çözelti serbestse, dönme hareketi hızlıdır ve yayılan ışık depolarize olur.
Floresansın polarizasyonu, yayılan ışığın dikey ve yatay olarak polarize bileşenlerinin yoğunlukları arasındaki fark olarak tanımlanan polarizasyon değeri (P) ile ölçülür:
[P = \ frac {i _ {\ paralel} -i _ {\ perp}} {i _ {\ paralel}+i _ {\ perp}}]
burada (i _ {\ paralel}) dikey olarak polarize yayılan ışığın yoğunluğudur ve (i _ {\ perp}) yatay polarize yayılan ışığın yoğunluğudur.
Floresan polarizasyonunu ölçmek için enstrümantasyon
Floresan polarizasyonunu ölçmek için, polarizasyon optikleri ile donatılmış bir floresan dedektörüne ihtiyacınız vardır. Şirketimiz, bir dizi yüksek kaliteli floresan dedektör sunuyor, bu daİzotermal floresan dedektörüveDijital izotermal floresan dedektörüDoğru ve hassas FP ölçümleri için özel olarak tasarlanmıştır.
Bu dedektörler tipik olarak aşağıdaki bileşenlerden oluşur:
- Işık kaynağı: Uyarma ışığını oluşturmak için ksenon lamba veya lazer gibi bir ışık kaynağı kullanılır. Işık, numuneye ulaşmadan önce polarize edilmelidir.
- Polarizörler: Polarizörler uyarma ve emisyon ışığının polarizasyonunu kontrol etmek için kullanılır. Uyarma polarizörü, doğrusal olarak polarize olduğundan emin olmak için uyarma ışığının yoluna yerleştirilir. Emisyon polarizör, yayılan ışığın dikey ve yatay polarize bileşenlerini ölçmek için dedektörün önüne yerleştirilir.
- Örnek tutucu: Numuneyi uyarma ışığının yolunda tutmak için bir numune tutucu kullanılır. Işık saçılımını ve arka plan floresanını en aza indirecek şekilde tasarlanmalıdır.
- Dedektör: Yayılan ışığın yoğunluğunu ölçmek için bir fotomultiplier tüp (PMT) veya şarj - birleştirilmiş cihaz (CCD) gibi bir fotodetektör kullanılır. Dedektör, dikey ve yatay olarak polarize bileşenlerin yoğunluklarını ayrı ayrı ölçebilmelidir.
Floresan polarizasyon ölçümleri için deney kurulumu
Floresan polarizasyonunu ölçmek için bir deneyin kurulmasında aşağıdaki adımlar yer almaktadır:
- Uygun floresan probunu seçin: Uygulamanız için uygun bir floresan prob seçin. Prob yüksek bir kuantum verimine ve uzun bir floresan ömrüne sahip olmalıdır.
- Örneği hazırlayın: Floresan probu uygun bir tamponda çözerek numuneyi hazırlayın. Bir bağlanma etkileşimi inceliyorsanız, uygun konsantrasyonda ligand veya makromolekülü numuneye ekleyin.
- Enstrümanı kalibre et: Floresan dedektörünü üreticinin talimatlarına göre kalibre edin. Bu, dedektörün kazancının ayarlanmasını, uyarma ve emisyon dalga boylarının ayarlanmasını ve arka plan floresansının ölçülmesini içerebilir.
- Polarizasyon değerlerini ölçün: Numuneyi numune tutucusuna yerleştirin ve yayılan ışığın dikey ve yatay polarize bileşenlerinin yoğunluklarını ölçün. Yukarıda belirtilen formülü kullanarak polarizasyon değerini hesaplayın.
Floresan polarizasyon ölçümlerini etkileyen faktörler
Çeşitli faktörler floresan polarizasyon ölçümlerinin doğruluğunu ve güvenilirliğini etkileyebilir:
- Sıcaklık: Floresan molekülün dönme hareketi sıcaklığa bağlıdır. Sıcaklıktaki bir artış, dönme hareketinde bir artışa ve polarizasyon değerinde bir azalmaya yol açar. Bu nedenle, ölçüm sırasında sabit bir sıcaklık korumak önemlidir.
- Çözücünün viskozitesi: Çözücünün viskozitesi, floresan molekülün dönme hareketini etkiler. Daha viskoz bir çözücü, dönme hareketini kısıtlar ve polarizasyon değerini arttırır.
- Floresan probun konsantrasyonu: Floresan probun konsantrasyonu polarizasyon değerini etkileyebilir. Yüksek konsantrasyonlarda, probun kendini söndürme ve toplaması meydana gelebilir, bu da yanlış ölçümlere yol açabilir.
- Foto -ağartma: Foto -ağartma, floresan molekülün uyarma ışığı ile geri döndürülemez yıkımıdır. Floresan yoğunluğunda bir azalmaya yol açabilir ve polarizasyon ölçümünü etkileyebilir. Foto -ağartmayı en aza indirmek için düşük yoğunluklu bir uyarma ışığı ve kısa pozlama süreleri kullanın.
Floresan polarizasyonunun uygulamaları
Floresan polarizasyonunun çeşitli alanlarda çok çeşitli uygulamaları vardır:
- Uyuşturucu keşfi: FP, ilaçlar ve hedefleri arasındaki bağlayıcı etkileşimleri incelemek için kullanılır. Polarizasyon değerini ölçerek, ilaç -hedef kompleksinin bağlanma afinitesini ve ayrışma sabitini belirleyebilirsiniz.
- İmmüno: FP tabanlı immünoanalizler, biyolojik örneklerde antijenlerin veya antikorların varlığını tespit etmek için kullanılır. Antijenin antikor etiketli floresan probuna bağlanması, analiti ölçmek için kullanılabilen polarizasyon değerinde bir değişikliğe yol açar.
- Nükleik asit analizi: FP, nükleik asitlerin hibridizasyonunu incelemek için kullanılabilir. Floresan olarak etiketlenmiş bir oligonükleotidin tamamlayıcı sekansına bağlanması, hedef nükleik asidi tespit etmek ve ölçmek için kullanılabilen polarizasyon değerinde bir değişikliğe yol açar.
Floresan polarizasyon ölçümlerinde sorun giderme
Floresan polarizasyon ölçümleri sırasında sorunlarla karşılaşırsanız, aşağıdaki sorun giderme ipuçları yararlı olabilir:
- Düşük kutuplaşma değerleri: Polarizasyon değerleri beklenenden daha düşükse, yüksek sıcaklık, solventin düşük viskozitesi veya floresan probun yüksek konsantrasyonu gibi faktörleri kontrol edin.
- Yüksek arka plan floresan: Yüksek arka plan floresanı, numunedeki veya çözücüdeki safsızlıklardan veya ışık saçılmasından kaynaklanabilir. Numuneyi saflaştırın ve temiz bir çözücü kullanın. Örnek tutucunun temiz ve çizilmeden uzak olduğundan emin olun.
- Tutarsız ölçümler: Tutarsız ölçümler foto -ağartma, polarizörlerin zayıf hizalanması veya ışık kaynağındaki dalgalanmalardan kaynaklanabilir. Foto -ağartmayı en aza indirin, polarizörlerin hizalanmasını kontrol edin ve ışık kaynağının sabit olduğundan emin olun.
Çözüm
Floresan polarizasyonunun ölçülmesi, floresan moleküllerin bağlanma etkileşimlerini ve moleküler dinamiklerini incelemek için değerli bir tekniktir. Bir floresan dedektörü tedarikçisi olarak, doğru ve güvenilir FP ölçümleri elde etmenize yardımcı olmak için yüksek kaliteli enstrümantasyon ve teknik destek sağlamaya kararlıyız. İster ilaç keşfi, immünoanalizler veya nükleik asit analizinde çalışıyor olun, bizimİzotermal floresan dedektörüVeDijital izotermal floresan dedektörüihtiyaçlarınızı karşılayabilir.
Floresan dedektörlerimizi satın almakla ilgileniyorsanız veya floresan polarizasyon ölçümleri hakkında herhangi bir sorunuz varsa, ayrıntılı bir danışma ve tedarik müzakeresi için lütfen bizimle iletişime geçin. Uzman ekibimiz, uygulamanız için en uygun enstrümanı seçmenize yardımcı olmaya hazırdır.
Referanslar
- Lakowicz, JR (2006). Floresan spektroskopisinin prensipleri. Springer Bilim ve İşletme Medyası.
- Szollosi, J. ve Damjanovich, S. (2004). Floresan polarizasyonu: Pratik bir rehber. Sitometride mevcut protokollerde (s. 1 - 17). John Wiley & Sons, Inc.