Akut solunum yolu enfeksiyonları, çocuklarda genellikle virüslerin neden olduğu yaygın solunum hastalıklarıdır. Solunum sinsityal virüsü (RSV) ve solunum adenovirüsü (ADV), çocuklarda akut solunum yolu enfeksiyonlarına neden olan iki yaygın patojendir. Hafif olgular öksürük ve burun gibi soğuk algınlığı semptomlarına neden olabilirken, şiddetli vakalar pnömoni ve otitis media gibi ciddi komplikasyonlara neden olabilir. Dünya Sağlık Örgütü'nün önerilerine göre, patojenlerin tespitinin hızlı, doğru, hassas ve spesifik olması ve özel teknisyenlere veya büyük enstrümanlara güvenmemesi gerekir. Bu nedenle, yukarıdaki algılama gereksinimlerini karşılayabilen RSV ve ADV için bir algılama yöntemi geliştirmek özellikle önemlidir.
Shenzhen Çocuk Hastanesi Pediatri Enstitüsü'nden MAD MA DONGLI araştırma grubu, "Bir Multipleks Rekombinaz Polimeraz Amplifikasyon Deneyi ve Solunum Sinsityal Virüsü ve Solunum Adenovirüs" Bilimsel Raporlarının saptanması için CRISPR/ CAS12A ile kombine bir makale yayınladı.
Araştırmaya Genel Bakış
Multi-enzim izotermal hızlı nükleik asit amplifikasyon teknolojisi MIRA, CRISPR/CAS tespit sistemi ile birleştirilir. MIRA primerleri ve CRISPR RNA'ları (CRRNA'lar) tasarlayarak, çoklu dizi karşılaştırmaları gerçekleştirerek, reaksiyon koşullarını optimize ederek ve hassasiyet ve özgüllüğü doğrulamak için floresan sayısal algılama cihazlarını kullanarak.
Ve qPCR sonuçlarını karşılaştırma kontrolü olarak kullanılarak, 160 klinik boğaz swab örneğinin test sonuçlarının tutarlılığı incelenmiştir.
Deneysel sonuçlar
1. MIRA-CRISPR/CAS12A Tespit yönteminin duyarlılığı ve özgüllüğü
MIRA yöntemi tespitinde, RSV-F1/R1 primer çifti, RSV, PIV, RHV, MP, CP, flub, HMPV, FluA veya RSV/CO ile enfekte hastaların boğaz sürü örneklerinden nükleik asitleri amplifiye etmek için kullanılır. Amplifiye bantları olan RSV ve ADV hariç, diğer sonuçlar negatifti, bu da seçilen MIRA primerlerinin test edilen diğer sekiz patojen ile çapraz reaksiyona girmediğini ve iyi korunduğunu gösterdi.
Daha sonra, RSV ve ADV rekombinant plazmidleri, steril su kullanılarak 10 kez seyreltildi ve RSV ve ADV için tespit sınırları 10 idi.6kopyalar/ml.
(1-10: RSV, RSV/ADV ko-enfeksiyonu ve diğer solunum patojen örneklerinden oluşan hastalardan boğaz sürü örnekleri)
2. QPCR ile karşılaştırın
QPCR yöntemi ile karşılaştırıldığında, RSV ve ADV'nin algılama sınırlarının her ikisi de 103 kopya/ml'dir.
(RSV ve ADV'nin qPCR tespitinin hassasiyeti)
MIRA-CRISPR yöntemi, kısa algılama süresi, basit çalışma ve büyük ölçekli qPCR enstrümanlarına deneysel operasyonlara gerek kalmayan taban laboratuvarları için daha uygundur.
3. Klinik örneklerin karşılaştırılması
Akut solunum yolu enfeksiyonu olan 160 çocuktan boğaz sürü örnekleri toplandı. Aynı zamanda, tespit için MIRA-CRISPR yöntemi ve qPCR yöntemi kullanıldı ve sonuçlar klinik çalışma sonuçları ile karşılaştırıldı.
QPCR yöntemi ile karşılaştırıldığında, MIRA-CRISPR yönteminin RSV ve ADV için hassasiyeti sırasıyla% 98.1 ve% 91.4 idi ve tespit özgüllüğü 1 0% 0 idi. Kappa değeri 0,95'ten büyüktür, bu da yüksek derecede tutarlılık gösterir.
MIRA-CRISPR yöntemi, RSV ve Adv. Viral enfeksiyonları derhal ve doğru bir şekilde tespit edebilir ve kıt tıbbi kaynaklara sahip alanlarda kullanım için daha uygundur.